來自瑞典斯德哥爾摩 KTH 皇家理工大學VINNOVA 連續加工生產能力中心的研究發現，重組腺相關病毒 （rAAV） 載體大量用于基因生產，但快速增長的全球需求給 rAAV 生產帶來了重大挑戰，其中生產能力仍然是一個關鍵瓶頸。

      為了解決這個問題，迫切需要提高產量的策略。本研究提出了一種使用高細胞密度 （HCD） 攪拌罐灌流培養生產 rAAV 的創新方法。使用攜帶 GFP 貨物的 rAAV1 和 rAAV9 載體作為模型，在懸浮 HEK293 細胞中以 5000 萬個細胞/mL 的高活細胞密度進行三質粒轉染，然后在整個生產過程中保持在 ≥ 3000 萬個細胞/mL。

     首先在 HCD 的 5 mL 假灌注離心管篩選系統中優化轉染和生產參數。然后通過在灌流模式下放大至 200 mL 攪拌罐生物反應器 （STR） 來驗證概念驗證。  這種強化工藝實現了與參考搖瓶培養物中觀察到的 100 萬個細胞/mL 的 rAAV9 生成水平相當的單細胞生成水平。

     通過在基于灌流的 STR 中以非常 HCD 進行轉染，這種方法有可能顯著提高 rAAV 體積生產能力，為滿足對基因療法日益增長的需求提供有前途的解決方案。